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本试剂盒适用于快速λ噬菌体DNA提取，将λ噬菌体裂解培养物离心后的上清，首先用RNase A/DNase I混合酶消化去除残留的宿主菌DNA/RNA，沉淀收集噬菌体，噬菌体被SDS裂解，残留碎片通过沉淀离心去除掉。裂解物上清中的λ噬菌体DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将λ噬菌体DNA从硅基质膜上洗脱。λ噬菌体载体广泛用于文库筛选，目的克隆培养获得大量的噬菌体颗粒需要提取λ噬菌体DNA来开展测序等后续工作。

• 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
  
• 节省时间，简捷，可用于液体培养裂解物和固体培养板提取，单个样品操作一般在1.5小时内完成。
  
• 产量高，典型的产量10mL λ噬菌体裂解培养物上清可以提取约10μg λ噬菌体DNA。
  
• 多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9。可以直接用来酶切和测序。

• 在RNaseA管和DNase I管分别加入1mL的裂解缓冲液吹打，颠倒混匀，充分溶解RNaseA和DNase I后，按照每次使用量分装-20℃冻存，有效期6个月。
  
• 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
  
• 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

• 使用转速可以达到13000rpm的冷冻离心机。
  
• 开始实验前将需要的水浴先预热到37℃备用。
  
• 需要自备氯仿，20％ SDS。
  
• 结合液LB含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

• 准备工作
  第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
  将噬菌体沉淀液放在冰上预冷。
  
• 操作步骤
  
  • 将0.5%氯仿处理后的λ噬菌体感染的液体培养物10000g(约12000rpm)4℃离心10分钟去除细胞碎片和残渣。
    
    • 转速不能过高，时间不能过长，否则噬菌体可能和碎片一起沉淀，降低产量。
  • 取10mL上清，加入20μL RNase和20μL DNase充分混匀37℃温育30分钟。
    
    • 每个噬菌体培养上清因生长和裂解情况不同而残留RNA/DNA量不等。RNase/DNase消化过头，可能减少产量；消化不完全，可能未消化的DNA/RNA和细胞碎片粘去部分噬菌体减低产量并/或者导致最后污染宿主菌DNA，因此应该根据实际情况适当调节用量和消化时间。
  • 加入2mL预冷的噬菌体沉淀液，轻柔充分混匀后置冰上冷却(培养板裂解物必须在冰上放置30分钟)。
    
  • 10000g(12000rpm)4℃离心10分钟，弃上清，干燥1分钟。沉淀下来的噬菌体外观为透亮或者稍白的沉淀。
    
  • 加入500μL裂解缓冲液，吹打重悬噬菌体，加入100μL 20％ SDS，立即轻柔颠倒混匀4～6次后，70℃温育10分钟，然后置冰上冷却。
    
  • 加入100μL杂质沉淀液，立即轻柔颠倒混匀4～6次，最高速13000g 4℃离心10分钟。
    
  • 仔细将上清转入新的离心管，加入350μL结合液LB，轻柔涡旋混匀。
    
  • 将上述混合物加入一个吸附柱AC中，(吸附柱放入收集管中)12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液。
    
    • 吸附柱一次最多只可以容纳大约700μL混合物，因此需要分次把混合物上到吸附柱内，重复步骤8。
  • 加入600μL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!)，12000rpm离心30秒，弃废液。
    
  • 可选步骤：重复步骤9一遍。
    
  • 将吸附柱AC放回空收集管中，13000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
    
  • 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μL洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在50℃水浴中预热)，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟。如果想得到较多量的DNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，12000rpm离心1分钟。
    
    • 洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于40μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。
  • DNA可以存放在2～8℃，如果要长时间存放，可以放置在-20℃。